Des prélèvements de salive permettent de discriminer les différents stades du cycle de reproduction chez la jument

Les techniques d’analyses ‘omics’ permettent un phénotypage précis, au niveau moléculaire, et peuvent être utilisées par l’éleveur comme outil de diagnostic et d’aide à la décision. Elles sont une piste pour le développement de l’élevage sur mesure, c’est-à-dire dont la cible sont les individus. Les stéroïdes sont de bons candidats pour cet objectif, dans la mesure où ils sont impliqués dans la régulation de nombreuses fonctions, en particulier la fonction de reproduction.
Actuellement, la plupart des études visant à tester les stéroïdes comme marqueurs des stades physiologiques des femelles d’élevage se sont focalisées sur leurs concentrations plasmatiques. Toutefois, les prises de sang réalisées pour des dosages hormonaux afin de déterminer le stade physiologique d’un animal peuvent être stressantes et provoquer une douleur plus ou moins importante en fonction de l’animal et du manipulateur, voire conduire à une réaction de retrait potentiellement dangereuse.

L’objectif des chercheurs de l’UMR PRC, en collaboration avec l’UE PAO, est de développer des méthodes alternatives aux prises de sang pour limiter les actes invasifs dans le cadre de la gestion de la reproduction des mammifères d’élevage. Les prélèvements de salive sont des actes non douloureux et non invasifs, qui peuvent être effectués facilement sur le terrain. Ils sont utilisés fréquemment chez l’humain, notamment chez les enfants, et sont en cours de développement chez les mammifères domestiques.

Le but de cette étude était d’analyser l’ensemble des molécules dérivées des stéroïdes (le stéroïdome) de la salive de juments à différents stades du cycle de reproduction, afin d’identifier si certaines de ces molécules pourraient constituer des biomarqueurs salivaires spécifiques des différents stades physiologiques liés à la reproduction.

Pour cela, nous avons collecté de la salive à l’aide d’une Salivette® sur 6 juments à 7 stades physiologiques différents : en anœstrus, en phase folliculaire 3 jours, 2 jours et 1 jour avant l’ovulation, le jour de l’ovulation, en phase lutéale 6 jours après l’ovulation, en gestation 18 jours après ovulation et insémination artificielle. Des prélèvements sanguins ont été réalisés en même temps que les prélèvements de salive pour comparer les concentrations salivaires et plasmatiques. Les analyses ont été réalisées par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse en tandem (U1195 INSERM Université Paris Saclay), technique de référence en termes de sensibilité, spécificité et précision pour identifier et quantifier les stéroïdes dans un échantillon biologique.

Vingt-cinq stéroïdes ont été détectés et quantifiés dans la salive des juments, dont la progestérone et ses dérivés (dihydroprogestérone, tétrahydroprogestérone, hexahydroprogestérone, hydroxyprogestérone), la prégnénolone et ses dérivés (dihydroprégnénolone et prégnénolone sulfate), la corticostérone, la cortisone, les androgènes (déhydroépiandrostérone, déhydroépiandrostérone sulfate, androsténédiol) et les œstrogènes (œstrone, œstradiol-17beta, œstriol).
Les concentrations salivaires de prégnénolone, précurseur de la progestérone, sont significativement plus élevées en gestation et tendent à être plus élevées en phase lutéale par rapport à l’anœstrus et aux jours précédents l’ovulation. En revanche, les concentrations plasmatiques de prégnénolone ne présentent pas de différences entre stades.
Les concentrations de progestérone dans la salive sont faibles et ne sont pas significativement différentes entre les 7 stades physiologiques étudiés, alors que les concentrations plasmatiques sont significativement plus élevées en phase lutéale et en gestation par rapport à l’anœstrus et à la phase folliculaire.
En revanche, les concentrations salivaires et plasmatiques de la plupart des métabolites 5alpha-réduits de la progestérone sont plus élevées en phase lutéale et en gestation par rapport à l’anœstrus et aux jours précédant l’ovulation.

En conclusion, les concentrations salivaires du précurseur et de plusieurs métabolites réduits de la progestérone sont plus élevées en phase lutéale et en gestation par rapport à l’anœstrus et à la phase folliculaire. Ces stéroïdes pourraient donc être des biomarqueurs salivaires permettant de différencier les juments cycliques, gestantes ou en anœstrus. Une étude complémentaire sur un plus grand nombre de juments est en cours pour confirmer ces résultats. Les niveaux de concentrations de la prégnénolone détectées dans la salive (de 0,5 à 6 ng/ml) permettent d’envisager l’utilisation de kits commerciaux de dosage EIA afin de développer un test salivaire de gestation ou de cyclicité applicable facilement sur le terrain.